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Label-free蛋白质组学非标记定量技术

2020-03-06 10:05 发布人:系统

Label-free样本无需标记,直接采用液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,通过比较质谱信号强度和谱图计数,来分析不同来源样本蛋白量的变化。

应用领域:
1.动植物组织或细胞、微生物、体液的蛋白组鉴定和相对定量;
2.Pull-down方法或免疫沉淀方法富集的蛋白鉴定和相对定量。

技术优点:
1.所需样本量少,可对微量样本进行分析,不受样本数量限制;
2.检测动态范围可以达到4个数量级以上,提高了低丰度蛋白质的检测效率;

可选仪器:
QExactive、QExactive Plus、QExactive HF、Orbitrap Fusion

分析流程
样品经Trypsin 酶切,酶切产物由高精度质谱分析,数据由
Mascot等软件进行分析。

 

可选数据分析
1.数据产出统计;
2.蛋白质鉴定及定量结果;
3.蛋白质GO分析及差异蛋白GO分析;
4.蛋白质Pathway通路分析及差异蛋白的Pathway通路分析;
5.重复性分析(仅针对有重复设计的项目);
6.多样品间表达模式聚类分析(适用于样本数≥3的项目)。

样品要求
蛋白提取物:≥50μg
细胞:≥106
组织:动物组织≥1mg,植物组织≥10mg
体液:血清≥5μL,脑脊液≥10μL