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PRM/MRM靶标定量技术

2020-03-06 09:59 发布人:系统

质谱多反应监测(PRM/MRM)定量技术是通过选择目标蛋白质的定量代表性肽段,让质谱仅对这些肽段进行质谱信号采集,从而获取目标蛋白质定量信息的质谱技术。利用该技术既可实现样品中靶标物质的相对定量,又可通过合成同位素标准肽段,绘制标准曲线,实现蛋白质的绝对定量。

应用领域:
1.可应用于蛋白质/多肽标志物验证、蛋白质翻译后修饰的定性定量研究和蛋白质/多肽药代动力学、临床诊断、违禁药物检查、食品化妆品等工业质量控制、环境检测、农业植物学研究。

技术优点:
1.PRM/MRM技术是目前所有质谱检测方式中灵敏度、重现性和准确度最高的定量技术,定量范围可达到5个数量级,定量重现性CV<10%, 相对误差<15%。
2.与经典的Westernblot、ELISA 技术相比,不需要使用抗体,获得更为准确和重现的定量验证结果。
3.在一个小时检测时间内可同时实现50个蛋白质的定量检测。
4.PRM可直接检测二级所有离子,减少了子离子的挑选和优化过程。

可选仪器:
QTRAP5500, QE, QE-Plus, QE-HF, Fusion, Lumos

分析流程:
样品经胰酶酶切后,在质谱检测
窗口中设置靶向检测列表,采用
PRM/MRM方法进行质谱数据采集。
定量数据采用Skyline软件处理。

 

样品要求:
蛋白提取物:≥50μg
细胞:≥106
组织:动物组织≥1 mg,植物组织≥10 mg
体液:血清≥5μL,脑脊液≥10μL