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转录因子DNA结合活性谱分析技术

2020-03-05 16:11 发布人:系统

转录因子DNA结合活性谱(Transcription factor DNA binding activity profiling),即利用转录因子可与序列特异性DNA元件结合的特点,设计合成了包括100种各类型的转录因子结合序列的串联多拷贝双链DNA结合元件(catTFRE),并将其用生物素标记以包装成“DNA诱饵”,用来富集细胞或组织中内源性转录因子。对富集的内源性转录因子可进一步利用蛋白/肽段分级分离联合质谱技术进行大规模鉴定和定量。

应用领域:
生理条件下动物细胞或组织中大规模转录因子鉴定和定量

技术优点:
1.独有专利技术,可对内源性转录因子进行深度覆盖
2.结合定量蛋白质组学技术,可同时对几百种甚至上千种转录因子与DNA结合序列的结合活性进行分析
3.可动态监测转录因子表达和基因调控活力

可选仪器
QExactive、QExactive Plus、QExactive HF、Orbitrap Fusion

分析流程
细胞或组织样品提取核蛋白,采用cat TFRE-pull down技术,沉淀下来的蛋白经过SDS-PAGE分离,胶内酶解后进行质谱鉴定,并采用专业软件进行转录因子分析。


可选数据分析
1.数据产出统计;
2.转录因子鉴定及定量结果;
3.转录因子下游调控靶基因分析。

样品要求
蛋白核提取物:≥500ug
细胞:≥107
组织:组织≥100mg